2004-02-29-世界卫生组织-WHO_Guidelines_on_viral_inactivation_and_removal_procedures_intended_to_assure_the_viral_safety_of_human_blood_plasma_products,_Annex_4,_TRS_No_924_75页_710kb

核酸病毒灭活与去除程序技术说明书（WHO，2004）

1. 概述与适用范围

聚焦保障人类血浆衍生物病毒安全性的验证性技术和操作指南，作为《血液、血浆衍生物收集与处理规范化要求》的补充。

2. 通用考量

• 病毒清除依赖三重保障：献血者选择、血浆筛查、灭活/去除工艺。
• 建议对浓缩因子类、免疫球蛋白及冷丙种等高风险产品优先部署多重屏障工艺。

3. 技术细节

3.1 病毒特性与筛选模型

• 主要关注病毒：HBV（dsDNA，包膜）、HCV（ssRNA，包膜）、HIV（ssRNA，包膜）。
• 代表性模型病毒：
  • HCV类似品：Sindbis病毒、BVDV。
  • 非包膜病毒：HAV、EMCV、PPV。
• 需严格按需选择具有拟态特性的模型病毒进行验证。

3.2 验证原则

• 实验需模拟工艺条件，通过限定剂量（≤1:9血/剂比）的血浆加病毒模型进行。
• 常用终点检测：TCID₅₀法评估病毒滴度。
• 料材质检、环境温控等验证记录应完整且可追溯。

3.3 验证步骤选取

• 核酸毒素类忌徒“两步走”：输入病毒量×输出降幅比，结合质量平衡校准。
• 关键流程：病毒引入观察 - 处理周期精度控制 - 接种液配比准确率。

4. 主流灭活/去除工艺

4.1 灭活法

（1）巴氏灭菌法

• 温度60℃±0.5℃持续10～11h；常伴随灭菌级过滤。
• 适用对象：白蛋白溶液、凝血因子制品。
• 优势：研发成熟，包膜病毒杀灭力强；但对非包膜病毒效果相对较弱。

（2）干热灭菌法

• 80℃±0.75℃持续72小时，适配冻干品。
• 须控制残余水分≤特定限值（如<5%），防止二次回温复燃。

4.2 去除法

弱电解处理法

• 三重复验标准：稀释效价>90%保留；病毒清除超量效≥6.0log。
• 料材质检、环境温控等验证记录应完整且可追溯。

5. 可在去化病毒操作

5.1 输血级病毒保证策略

• 检疫/复检策略
  • 持续3-4个月查漏补缺期。
  • 受访国例证显示，在隔离期依然存在HCaV传播风险。

5.2 溶剂/去污剂法

• 柠檬酸乙酯(TNBP)配苔尔皂角(W)溶剂体系。
  • 灭活效果显著（包膜病毒灭活达≥5.0log）。
  • 制品保留期≤30个月前提下，污染缓解率≥85%。

5.3 妖精蓝+光照法

• 聚乙炔衍生物光触媒能有效灭活包膜类病毒群。
  • 出血因子絮凝酶维生效益在1000单位以上。
• 非包膜病毒抗性较强，需配合残余物评估。

6. 末端灭活技术

6.1 巴氏灭菌法（终产物）

• 常规温度上限80℃，持续72小时。
• 受限于物理特性，本法常配置于制品灭活段。

6.2 甲基苯二异氰酸酯氧化肽（UVC��明法）

• 超短波近紫外光（254nm）穿透核酸。
• 已用于免疫因子制品；包括致死RNA病毒。

6.3 防腐蚀放射能法（Gamma-icon）

• 60钴源γ射线穿透力强，可兼处理蛋白质与核酸。
• 需综合调控温度、湿度、剂量率以平衡活性失活比。

7. 输血级病毒保障案例

• 产物选择策略沿革：
  • 从单纯血浆输液进化为多种保障模型系统组合。
• 关键技术参数追踪：输入抗体数量、物理化学性能残留值已纳入申报体系。
• 阴性筛选建议：避免单独使用酸性处理法，建议以包膜病毒击倒为前提，配合非包膜清除辅助手段使用。

8. 未来展望与建议

• 夫新技术：碘载体/聚季铵盐法方兴未艾。
• 组合模型+化合物渗漏控制成为下一研究周期重大挑战。
• 开展联合灭活型（枯草芽胞孢肽-光/生物多肽）原料可靠性验证。